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利用復合酶制劑去除廢紙漿中膠黏物的方法

放大字體??縮小字體 發布日期:2018-06-15
核心提示:利用復合酶制劑去除廢紙漿中膠黏物的方法提供一種以高溫酯酶TTEST為主的復合酶制劑去除廢紙漿中膠黏物的方法。  步驟如下: 
利用復合酶制劑去除廢紙漿中膠黏物的方法
提供一種以高溫酯酶TTEST為主的復合酶制劑去除廢紙漿中膠黏物的方法。
  步驟如下:
  (1)高溫酯酶TTEST的制備:
  將酯酶TTEST菌種接種到種子液體培養基振蕩培養,再將菌種接種到發酵培養基振蕩培養,制備得到高溫酯酶TTEST粗酶液,將高溫酯酶TTEST粗酶液純化,用對硝基苯酚比色法測定高溫酯酶TTEST的酶活。
  利用全基因合成方法獲取的TTEST酯酶的編碼基因,并克隆到表達載體pET23a-CBD載體上獲得重組表達載體。利用CaCl2轉化法,將含有TTEST酯酶編碼基因的表達質粒轉入BL21(DE3)菌種中,獲得基因工程菌。將酯酶TTEST的菌種接到含Amp(100ug/ml)的LB種子培養基中擴大培養,當OD值達到0.6~0.8時,將菌液按照1:100的比例接種到含Amp(100ug/ml)的L B發酵培養基中,搖至OD值為0.6~0.8時加入I PTG(20mmol/L)誘導劑進行誘導表達,18~24h后收菌。將菌液在12000r/min條件下離心10min后收集管壁細胞進行超聲破碎,之后再以12000r/min條件離心10min后取上清液,即得到粗酶液。利用纖維素與酯酶進行特異性結合,之后再用3C蛋白酶進行酶切從而得到純酶。1L菌液對應1g纖維素,常溫下將粗酶液與纖維素結合30min,適時攪拌。結合后高速離心10min,棄去上清液,將吸附蛋白用PBS緩沖液洗兩次。3C蛋白酶在使用前先離心、棄去上清,利用PBS緩沖液清洗2次。向吸附蛋白中加入適量PBS,按1L菌液對應1ml 3C蛋白酶的比例混勻后酶切4h或過夜。酶切后高速離心,上清液即為純酶。之后利用對硝基苯酚比色法測定制備的高溫酯酶TTEST的酶活,測得酶活為3500U/g。脂肪酶CALB為商品化脂肪酶,測得酶活為150.0U/ml。
  (2)按照質量百分數計,將高溫酯酶TTEST(45%~50%)與淀粉酶(15%~20%)、果膠酶(10%~15%)、木聚糖酶(10%~15%)、甘油(5%)、聚乙二醇(5%)、水(5%~10%)復配成復合酶制劑。
  (3)稱取100g OCC絕干漿,稀釋到相應漿濃,添加一定量的酶,在一定的處理溫度、pH值、處理時間、攪拌轉速下(如表1),按照TAPPIT-277膠黏物測定法利用Pulmac-MasterScreen篩分儀將漿料進行篩選,之后將篩出的膠黏物進行染色、壓片,最后用掃描軟件進行分析掃描,進而測得酶處理后的膠黏物含量。
  在不加酶的情況下,用其余相同條件處理廢紙漿,實驗測定結果為空白組膠黏物含量。
  復合酶制劑的添加量為廢紙漿絕干漿質量的0.1%~1.0%,處理溫度為40~80℃,處理時間45~120min,pH為6.0~9.0,攪拌轉速為100~150r/min。
  復合酶處理廢紙漿的溫度為50~55℃,復合酶處理廢紙漿的攪拌條件為120r/min,反應時間為60min。復合酶的添加量為廢紙漿絕干漿質量的0.3%~0.5%。復合酶處理廢紙漿的pH為7.0~8.0。廢紙漿的漿濃為4%~6%。
  高溫酯酶的酶活為3500U/g。淀粉酶酶活為5000U/g,果膠酶酶活為5000U/g,木聚糖酶酶活為10000U/g。

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關鍵詞: 紙漿



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